Разработка плана направленного химико-токсикологического исследования на трифтазин (группа фенотиазинов) в моче

Федеральное агентство по здравоохранению и социальному развитию

Всероссийский центр по непрерывному медицинскому и фармацевтическому образованию

Государственное образовательное учреждение Высшего профессионального образования

Самарский Государственный Медицинский университет

Кафедра химии фармацевтического факультета

Контрольная работа по токсикологической химии:

Разработка плана направленного химико-токсикологического исследования на трифтазин (группа фенотиазинов) в моче

Выполнила студентка 5 курса

фармацевтического факультета

группы 574 Иванова Е.А.

Проверил: Воронин А.В.

Самара 2008

Распространенность и характер интоксикаций

Препараты фенотиазинового ряда, так же как и другие психотропные, антигистаминные и сердечно-сосудистые средства, кроме собственно терапевтического эффекта, проявляют побочное и токсическое действие.

Введение их в организм в дозах, превышающих терапевтические (медицинские ошибки, бытовые и суицидальные отравления), нередко приводит к летальным исходам. Описано большое количество отравлений этими соединениями, нередко в сочетании с другими лекарственными препаратами (барбитуратами, производными изоникотиновой кислоты, имизином, антибиотиками, инсулином и др.).

Производные фенотиазина обладают кумулятивными свойствами и длительно выводятся из организма. Например, терапевтическая доза аминазина (50 мг) выводится из организма в течение 14-20 дней. Смертельные случаи могут наблюдаться при приемах обычных терапевтических доз.

Клиника течения отравлений производными фенотиазина во многом зависит от возраста, пола, дозы принятого лекарства и не является характерной и специфичной. Нехарактерна также и патологоанатомическая картина. Химическое исследование крови и мочи больных, а также внутренних органов и биологических жидкостей погибших могут оказать существенную помощь в диагностике отравления.

Структурная формула, классификация и общая характеристика группы

2-Трифторметил-10- [3-(1-метилпиперазинил-4)-пропил] -фенотиазина дигидрохлорид.

По химическому строению трифтазин отличается от хлорпромазина тем, что вместо атома хлора в положении 2 фенотиазинового ядра содержит группу СF3, а в боковой цепи -- ядро пиперазина, замещённое при атоме азота в положении 4 группой СН3, (как у метеразина).

Физико-химические свойства

Белый или слегка зеленовато-желтоватый кристаллический порошок. Легко растворим в воде, растворим в спирте. На свету темнеет.

Токсикокинетика

При приеме внутрь всасывается не полностью. Cmax достигается через 2-4 ч, при в/м введении - через 1-2 ч. В плазме связывается с белками на 99%. Проникает через ГЭБ. Метаболизируется в печени. T1/2 составляет 15-30 ч. Экскретируется почками в основном в виде метаболитов. Токсическая концентрация в крови - 1-2 мг/л, смертельная - 3-12 мг/л.

Биотрансформация производных фенотиазина идет по основным типам метаболизма; сульфоокисление, деметилирование, образование N-оксида, гидроксилирование и т. д. Главным метаболитом, общим для всех производных фенотиазина, является сульфоксид.

Объекты химико-токсикологического анализа. Правила пробоотбора.

Объектами исследования на производные фенотиазинового ряда являются желудок и кишечник с содержимым, печень, легкие, почки, кровь и моча. В трупном материале производные фенотиазина и их метаболиты сохраняются (при температуре от -20 до +130С) до 3 месяцев. Консервирование материала этиловым спиртом увеличивает сохраняемость производных фенотиазина в трупном материале.

Методы пробоподготовки мочи для определения трифтазина в зависимости от метода исследования.

1) так как производные фенотиазинов выводятся в виде глюкуронидов, то требуется гидролиз мочи (нагревают пробу в течение 30 минут с концентрированной соляной кислотой).

2) затем экстрагируют фенотиазины смесью гептан-3% изопентанол для ГЖХ; бензол-диоксан-25% аммиак (60:35:5) или этилацетат-ацетон-25% аммиак в этаноле 1:1 (50:45:4) для ТСХ.

Методы анализа

Методы предварительного анализа

1) огранолептический контроль: оценка цвета мочи - красно-коричневый

2) оценка смешиваемости с водой - не смешивается.

3) предварительные хромогенные реакции, используя реактив Марки - красно-коричневый цвет.

2) для экспресс-определения фенотиазинов в моче используют реакцию с FNP-реактивом, который состоит из смеси водного раствора хлорида железа (III), хлорной кислоты (HClO4) и азотной кислоты (1:9:10). Появляющаяся окраска от розовой до сине-фиолетовой свидетельствует о присутствии фенотиазинов или их метаболитов. Определению мешают салицилаты, желчные пигменты и пр.

3) Фотоколориметрический метод определения основан на реакции с концентрированной серной кислотой. Фотометрирование проводят при л=508 нм в кювете 5,105; эталон сравнения -- контроль реактивов. Расчет содержания препаратов производится по калибровочному графику.

4) Спектрофотометрический метод основан на количественной оценке поглощения растворов препаратов в ультрафиолетовой области. Ультрафиолетовый спектр снимается в диапазоне длин волн 220-400 нм на СФ-4, СФ-4а и др. при концентрации 10 мкг/мл в пересчете на основание.

5) По этим методикам обнаруживается 53-60% препарата, добавленного к органам. Граница обнаружения 0,2 мг, граница определения 0,5 мг препарата в 100 г органов.

Методы подтверждающего анализа

Метод ГЖХ, температура колонки 2300С.

Для дифференцировки используют ГХ-МС элюат с ТСХ-пластин по нативным соединениям. Для этого на хроматографическую пластинку наносят каплю исследуемого раствора. Нанесенное пятно подсушивают на воздухе. Рядом наносят растворы известных препаратов, производных фенотиазина («свидетели») и вновь подсушивают пластинку. Затем пластинку вносят в камеру для хроматографии, насыщенную парами растворителя (смесь 25% раствора аммиака и этилового спирта в соотношении 1:1, либо 25% раствора аммиака, этилацетата и ацетона 4:90:45). После хроматографирования пластинку проявляют 50% раствором серной кислоты в этиловом спирте. Затем пластинку помещают на 3-5 мин в сушильный шкаф, нагретый до 1000С. Проявившееся пятна сравнивают с пятнами «свидетелей» или по справочным значениям Rf.

ВЭЖХ-определение с использованием автоматических анализаторов. Предел обнаружения 0,1 мкг/мл.

Детектирование спиртовым раствором концентрированной серной кислотой (9:1) или реактивом Марки (H2SO4+CH2O) - темно-красное окрашивание.

С формалином и серной кислотой производные фенотиазина дают пурпурно-красное окрашивание, усиливающееся при стоянии

С концентрированной азотной кислотой возникает пурпурно-красное окрашивание (образование сульфоксида), которое быстро исчезает (образование сульфона)

С реактивом Манделина дает окраску от красной до фиолетовой

Библиографический список

Гуськова Т.А. Токсикология лекарственных средств. - М., 2003.

Карпов Ю.А., Савостин А.П. Методы пробоотбора и пробоподготовки. - М., 2003.

Крамаренко В.Ф. Токсикологическая химия. - М., 1989.

Токсикологическая химия / под ред. Т.В.Плетеневой. - М.: Изд.группа «ГЭОТАР-Медиа», 2006.